|
|
Study on potential applications of glutamic acid polymer
Čangelová, Katarína ; Skoumalová, Petra (oponent) ; Obruča, Stanislav (vedoucí práce)
The subject of the thesis is study of possible applications of isoform of glutamic acid polymer (-PGA). The theoretical part is focused on the properties of this biopolymer and potential applications in various areas. Producers and mechanisms of biosynthesis are also mentioned. In the experimental part, the polymer was firstly characterised by following methods: FT-IR spectroscopy, TGA, DSC and SEC-MALS. Its isoelectric point, antimicrobial activity and solubility in various solvents were also determined. The biopolymer was also precipitated by divalent cations and its interaction with oppositely charged CTAB surfactant was studied. The main experimental study was researching the effect of -PGA on viability of Saccharomyces cerevisiae and Lactobacillus rhamnosus under stress conditions by flow cytometry. The performed stresses included ethanol exposure, high temperature and freezing stress, in which its effects were compared to conventional cryoprotectants. The cells of the mentioned microorganisms were also stressed osmotically and exposed to model gastrointestinal juices - gastric, pancreatic and bile. The protective effects of -PGA on the cells were recorded in ethanol stress on Lactobacillus rhamnosus. Its excellent cryoprotection properties were confirmed and its protective effect of gastric juice exposure on Saccharomyces cerevisiae cells was also observed. At the end of the experimental part, -PGA/alginate beads suitable for encapsulation of probiotic bacteria and -PGA/chitosan nanoparticles for encapsulation of biologically active substances.
|
|
|
Ovlivnění životaschopnosti enkapsulovaných bakterií přídavkem vybraných druhů nutrientů
Resová, Daniela
Probiotika jsou citlivá na vnější podmínky, což může mít za následek snížení životaschopnosti při jejich manipulaci, zpracování a skladování. Jednou z možností zvýšení životaschopnosti a stability je jejich imobilizace. V experimentální časti této diplomové práce jsou probiotické bakterie, konkrétně sbírkový kmen Lb. rhamnosus, lyofilizovány s přídavkem kryoprotektantů. Kultura obohacená o 10% roztok sacharózy nebo 2,5% roztok glycerolu byla lyofilizována a následně byla vyhodnocena vhodnost látek pro ochranu lyofilizovaných bakterií. Jako vhodnější kryoprotektant byla zvolena sacharóza, protože pokles životaschopnosti po lyofilizaci byl pouze 3,28 % z původního množství KTJ před lyofilizací. Pokles kontrolního vzorku i vzorku s glycerolem byl statisticky významný (p < 0,01). V této práci byla zaváděna také enkapsulace Lb. rhamnosus metodou extruze. Do alginátové matrice byly přidávány nutrienty a následně byl testován vliv enkapsulace, přidaných nutrientů a rozpouštění kapslí na životaschopnost enkapsulovaných probiotik. Nutrientem s nejpříznivějším vlivem na životaschopnost a stabilitu Lb. rhamnosus byl vyhodnocen alginát s přídavkem syrovátky. Oproti variantě alginátu s přídavkem inulinu a kontrolnímu vzorku byl pozorován statisticky významný rozdíl (p < 0,01). Stejný test životaschopnosti byl proveden i po 2 týdnech skladování při 4 °C. Skladování mělo negativní vliv na všechny varianty. Nejmenší pokles byl ale pozorován u kontrolního vzorku a vzorku s kryoprotektivní sacharózou a přídavkem syrovátky.
|
|
|
Influence of freezing and thawing process on cryopreserved cells nuclei and surfaces. Functions and physico-chemical properties of cryoprotectants.
Golan, Martin ; Kratochvílová, Irena (vedoucí práce) ; Raška, Milan (oponent) ; Schneider, Bohdan (oponent)
1 Abstrakt: Kryoprezervace buněk je komplexní proces nalézající uplatnění v základním biologickém výzkumu, lékařství i zemědělství. Tato práce prohlubuje současné chápání kryoprezervace buněk a jejích důsledků, a to na biologické i fyzikální úrovni. Výsledky obsahují charakteristiku chování vybraných kryoprotektantů (především DMSO, trehalóza, antifreeze protein ApAFP752) v kapalné fázi, v pevné fázi i během tuhnutí. Pozornost je rovněž věnována charakteru a míře poškození rozmrazených buněk, u nichž byla sledována jejich viabilita a vývoj stavu jejich povrchu a jádra (integrita jaderné membrány, úroveň kondenzace chromatinu, přitomnost dvojných zlomů DNA). Důležitým výsledkem je, že S-fázní buňky (NHDF a MCF7 linie) během kryoprezervace utrpí rozsáhlý kolaps replikačních vidliček, což představuje závažné poškození. Je tedy vhodnější mrazit buňky v jiných fázích buněčného cyklu. Ke sledování stavu rozmrazených buněk byla použita především mikroskopie atomárních sil (AFM), konfokální fluorescenční mikroskopie a průtoková cytometrie. Získané poznatky mohou být použity k optimalizaci používaných kryoprezervačních protokolů a k lepšímu hodnocení účinnosti a šetrnosti nově vyvinutých kryoprotektantů.
|
|
|
Influence of freezing and thawing process on cryopreserved cells nuclei and surfaces. Functions and physico-chemical properties of cryoprotectants.
Golan, Martin ; Kratochvílová, Irena (vedoucí práce)
1 Abstrakt: Kryoprezervace buněk je komplexní proces nalézající uplatnění v základním biologickém výzkumu, lékařství i zemědělství. Tato práce prohlubuje současné chápání kryoprezervace buněk a jejích důsledků, a to na biologické i fyzikální úrovni. Výsledky obsahují charakteristiku chování vybraných kryoprotektantů (především DMSO, trehalóza, antifreeze protein ApAFP752) v kapalné fázi, v pevné fázi i během tuhnutí. Pozornost je rovněž věnována charakteru a míře poškození rozmrazených buněk, u nichž byla sledována jejich viabilita a vývoj stavu jejich povrchu a jádra (integrita jaderné membrány, úroveň kondenzace chromatinu, přitomnost dvojných zlomů DNA). Důležitým výsledkem je, že S-fázní buňky (NHDF a MCF7 linie) během kryoprezervace utrpí rozsáhlý kolaps replikačních vidliček, což představuje závažné poškození. Je tedy vhodnější mrazit buňky v jiných fázích buněčného cyklu. Ke sledování stavu rozmrazených buněk byla použita především mikroskopie atomárních sil (AFM), konfokální fluorescenční mikroskopie a průtoková cytometrie. Získané poznatky mohou být použity k optimalizaci používaných kryoprezervačních protokolů a k lepšímu hodnocení účinnosti a šetrnosti nově vyvinutých kryoprotektantů.
|
|
|
Study on potential applications of glutamic acid polymer
Čangelová, Katarína ; Skoumalová, Petra (oponent) ; Obruča, Stanislav (vedoucí práce)
The subject of the thesis is study of possible applications of isoform of glutamic acid polymer (-PGA). The theoretical part is focused on the properties of this biopolymer and potential applications in various areas. Producers and mechanisms of biosynthesis are also mentioned. In the experimental part, the polymer was firstly characterised by following methods: FT-IR spectroscopy, TGA, DSC and SEC-MALS. Its isoelectric point, antimicrobial activity and solubility in various solvents were also determined. The biopolymer was also precipitated by divalent cations and its interaction with oppositely charged CTAB surfactant was studied. The main experimental study was researching the effect of -PGA on viability of Saccharomyces cerevisiae and Lactobacillus rhamnosus under stress conditions by flow cytometry. The performed stresses included ethanol exposure, high temperature and freezing stress, in which its effects were compared to conventional cryoprotectants. The cells of the mentioned microorganisms were also stressed osmotically and exposed to model gastrointestinal juices - gastric, pancreatic and bile. The protective effects of -PGA on the cells were recorded in ethanol stress on Lactobacillus rhamnosus. Its excellent cryoprotection properties were confirmed and its protective effect of gastric juice exposure on Saccharomyces cerevisiae cells was also observed. At the end of the experimental part, -PGA/alginate beads suitable for encapsulation of probiotic bacteria and -PGA/chitosan nanoparticles for encapsulation of biologically active substances.
|
|
|
Influence of freezing and thawing process on cryopreserved cells nuclei and surfaces. Functions and physico-chemical properties of cryoprotectants.
Golan, Martin ; Kratochvílová, Irena (vedoucí práce)
1 Abstrakt: Kryoprezervace buněk je komplexní proces nalézající uplatnění v základním biologickém výzkumu, lékařství i zemědělství. Tato práce prohlubuje současné chápání kryoprezervace buněk a jejích důsledků, a to na biologické i fyzikální úrovni. Výsledky obsahují charakteristiku chování vybraných kryoprotektantů (především DMSO, trehalóza, antifreeze protein ApAFP752) v kapalné fázi, v pevné fázi i během tuhnutí. Pozornost je rovněž věnována charakteru a míře poškození rozmrazených buněk, u nichž byla sledována jejich viabilita a vývoj stavu jejich povrchu a jádra (integrita jaderné membrány, úroveň kondenzace chromatinu, přitomnost dvojných zlomů DNA). Důležitým výsledkem je, že S-fázní buňky (NHDF a MCF7 linie) během kryoprezervace utrpí rozsáhlý kolaps replikačních vidliček, což představuje závažné poškození. Je tedy vhodnější mrazit buňky v jiných fázích buněčného cyklu. Ke sledování stavu rozmrazených buněk byla použita především mikroskopie atomárních sil (AFM), konfokální fluorescenční mikroskopie a průtoková cytometrie. Získané poznatky mohou být použity k optimalizaci používaných kryoprezervačních protokolů a k lepšímu hodnocení účinnosti a šetrnosti nově vyvinutých kryoprotektantů.
|
|
|
Influence of freezing and thawing process on cryopreserved cells nuclei and surfaces. Functions and physico-chemical properties of cryoprotectants.
Golan, Martin ; Kratochvílová, Irena (vedoucí práce) ; Raška, Milan (oponent) ; Schneider, Bohdan (oponent)
1 Abstrakt: Kryoprezervace buněk je komplexní proces nalézající uplatnění v základním biologickém výzkumu, lékařství i zemědělství. Tato práce prohlubuje současné chápání kryoprezervace buněk a jejích důsledků, a to na biologické i fyzikální úrovni. Výsledky obsahují charakteristiku chování vybraných kryoprotektantů (především DMSO, trehalóza, antifreeze protein ApAFP752) v kapalné fázi, v pevné fázi i během tuhnutí. Pozornost je rovněž věnována charakteru a míře poškození rozmrazených buněk, u nichž byla sledována jejich viabilita a vývoj stavu jejich povrchu a jádra (integrita jaderné membrány, úroveň kondenzace chromatinu, přitomnost dvojných zlomů DNA). Důležitým výsledkem je, že S-fázní buňky (NHDF a MCF7 linie) během kryoprezervace utrpí rozsáhlý kolaps replikačních vidliček, což představuje závažné poškození. Je tedy vhodnější mrazit buňky v jiných fázích buněčného cyklu. Ke sledování stavu rozmrazených buněk byla použita především mikroskopie atomárních sil (AFM), konfokální fluorescenční mikroskopie a průtoková cytometrie. Získané poznatky mohou být použity k optimalizaci používaných kryoprezervačních protokolů a k lepšímu hodnocení účinnosti a šetrnosti nově vyvinutých kryoprotektantů.
|
|
|
REZISTENCE EMBRYÍ NĚKTERÝCH DRUHŮ RYB KE KRYOPROTEKTIVŮM PŘI NÍZKÝCH TEPLOTÁCH
ALDORF, Milan
Na modelových druzích, tzn. kapru obecném (Cyprinus carpio) a línu obecném (Tinca tinca), byly testovány různé kryoprotektivní média pro zmrazování embryí. Cílem studia bylo získání takového kryoprotektivního media, které bude vhodné pro zmrazovaní embryí do teploty -196 oC. U lína obecného byly odzkoušeny kryoprotektiva 10 % a 20 % methanolu nebo 10 % a 20 % glycerinu po dobu 21 minut u embryí ve čtyřech stádiích a to 11, 17, 23 a 29 hodin po aktivaci gamet. Výsledky ukázaly, že embrya lína jsou nejodolnější jak ke snížení teploty, tak ke kryoprotektivu ve stádiu 29 hodin od aktivace gamet a naopak nejméně odolné ve stadiu 11 hodin od aktivace gamet ve srovnání s kontrolou neošetřených embryí. U embryí kapra obecného ve stáří 2, 6, 22, 24 a 42 hodin po aktivaci gamet při teplotě 18 a 22 oC bylo testováno v koncentrační řadě kryoprotektivum metanol a dva roztoky pod označením VS1 a VS2 po předchozím narušení obalu jiker v roztoku enzymu alkalázy. Výsledky ukázaly na snižování rezistence embryí v závislosti na zvyšování koncentrace kryoprotektiva u metanolu. Líhnivost u roztoků VS1 a VS2 i při nejvyšší koncentraci nepoklesla pod hodnotu 60 %. Dosažené výsledky roztoku VS2 byly následně využity pro zmrazování embryí kapra metodou vitrifikace. První výsledky ukázaly až 4 % přežití embryí po uchovávání při teplotě -196 oC.
|
host ::
RSS.